培养基的质量控制「论坛热帖常见培养基质量控制问题汇总」

你是不是有很多关于培养基的问题，有时又找不到相应的解决方法，今天检测狮整理了一些问题的解决办法和大家分享一下！

1. 灭菌后的培养基是否都要测pH值？如何测定pH值？

答：每个制备批次的培养基都应测定pH，可采用pH试纸或pH计测量。

2.含琼脂培养基冷却至25℃后已凝固，如何测定其pH？

答：有专门的固体培养基pH计，如Radiometer A /S, DK22400 Copen2 hagen NV, Denmark 或者Microelectrodes Inc1, NH 03053,U1S1A1 。

3. 稀释液灭菌后pH值是否有变化？有何影响？（如pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，pH6.8无菌磷酸盐缓冲液）

答：一般pH有下降现象，约0.2左右，不同培养基pH变化可能不同。

4. 孟加拉培养基是否可以取代玫瑰红钠琼脂进行培养霉菌和酵母菌？

答：根据中国药典，采用玫瑰红钠琼脂。

5. 配制pH值7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液时有时因为高压灭菌器灭菌过程温度过高而导致培养基混浊了，这种情况缓冲液还能用吗？

答：建议按正常温度灭菌，混浊培养基建议不要使用。

6.含琼脂培养基在冷藏中形成冰晶怎么处理？销毁还是加热再用？

答：建议不要使用。

7.融化的培养基为什么不能再冷水中冷却？

答：防止受热不均引起结块。

8. 灭菌后，灭菌锅需自然冷却降压才可以打开，这段时间是否会造成过度灭菌。

答：自然冷却过程已经计算在正常灭菌时间内了，不会造成过度灭菌。

9. 培养基所用器具若使用湿热灭菌，是否必须待干燥后才可以使用？若烘干或其它方法，中间过程怎样防止微生物污染？

答：如果是马上使用且不是用于非水溶性供试液的制备及实验，不一定要烘干；否则，应干燥后使用，灭菌及干燥尽量在同一锅里进行，或用纱布和牛皮纸包扎紧密。

10. 培养基的避光储存，是否配置好的培养基其全部放避光储存？

答：最好都避光保存。无条件时，光敏感的培养基一定要。

11. 商品培养基干粉说是加蒸馏水溶解，实际操作是否可以用纯化水或注射用水？

答：只要不含有任何可能抑制或影响微生物生长的物质的水均可。

12. 培养基及器具灭菌可否同一设备同灭菌时间进行灭菌？

答：最好分开灭菌，条件不允许时可同炉灭菌，前提是都是洁净无污染的。

13. 培养基的保温能否用60℃的培养箱，它与45℃—55℃水浴锅保温方法有何不同？

答：可以用恒温培养箱保温，但保温温度一般是50℃左右，且时间不能过长，一般是不超过4小时。

14. 培养基的贮存是否需要放置于2—10℃冰箱内？

答：需冷藏保存的培养基外包装上会写明。

15. 培养基灭菌后成份会有所蒸发减少，如何处理这个问题？

答：正常情况下蒸发量较少，可忽略不计。

16. 培养基融化后出现浑浊是有哪些方面的原因引起的？应如何避免？

答：可能的情况有:

1. 培养基配置用水不符合规定；

2. 灭菌过程温度升温慢或降温慢；

3. 培养基储存不当；

4.融化时沸腾时间较长等。

17. 准备好的培养基有效期如何验证？

答：定期取出培养基验证其无菌性，促生长能力等方面。

18. 培养基配制好灭菌后，在高压容器中保温降至50℃左右，可不可行？

答：建议最好不要，避免过度受热。

19. 脱水培养基对湿度是否有要求？多少适宜？

答：按要求室温干燥环境储存即可。

20. 培养基pH值测定温度在25℃，这个温度应怎么控制？比如固体培养基，固体培养基使用过程中还能调节pH值吗？

答：可水浴控制培养基温度。

21. 配制培养基过程中，按说明书称定量，加规定的纯化水，煮沸溶解，为了避免煮沸过程总减少水分，是否要在配制过程适当增加水?比如陪硫乙醇酸盐流体培养基.

答：可适量增加，自己掌握。

22. 商品培养基一定要当天配当天用吗？可否在一周内用完？

答：不是即配即用的培养基的话，储存的当，可以使用。

23. 称量培养基时，注意不要吸入粉末，这粉末是指何物？

答：就是你所称量的干粉培养基 ，因为培养基的粉末对呼吸道有刺激作用，而且培养基中的某些成分，如亚硒酸盐、叠氮化钠、乙酰胺等，长期吸入并在体内累积到一定量会对人体健康有危害。所以培养基配制称量需做好个人防护，且最好选择少粉尘环保型颗粒培养基。

24. 煮培养基，用不锈钢锅在电磁炉上煮可行？硫乙醇培养基是否要煮沸？如何煮沸？用不锈钢锅在电磁炉上煮沸可行吗？可不可以水浴煮沸呢？

答：硫乙醇应煮沸，量大时，我实验室用不锈钢锅在电磁炉上煮沸。不建议水浴煮沸，因为水浴煮沸琼脂粉很难溶，导致琼脂分装不均匀，前段分装的琼脂含量少，后段分装的琼脂含量高，导致有的管或瓶中的FT凝固。

25. 如培养基在高压灭菌器中温度需自然下降20度才开盖吗？

答：高温灭菌器有安全阀，温度下降到安全阀可打开时将培养基取出室温冷却，各型号灭菌器安全开盖温度不尽相同。

26.平板涂布和平板划线培养基表面水分过多，菌落蔓延如何解决？

对于采用表面接种形式培养的固体培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱或培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。

培养基的质量控制包括哪些方面?

(1)操作卡：各微生物室应具备标准的培养基操作卡，内容包括培养基的成分，配制及注意事项。
(2)培养基的质量要求：①配制记录：应注明培养基原料的开封日期、储存条件、有效期、有否受潮结块等。在配制每批培养基时应作配制记录，内容包括培养基的名称、数量、配方、灭菌、分装、贴标签、配制日期、有效期等；②培养基外观的检查：观察颜色和透明度是否正常，液体培养基是否澄清，固体培养基是否干裂及细菌生长，pH是否在规定的±O.2之内；③无菌试验：凡以无菌手续分装的培养基均应在35℃培养24h，无菌生长者方可使用；④性能试验：对所制备的各种培养基须用适当的标准菌株进行预测，符合要求者方可使用。

第一节—培养基的制备和质量控制

前面几章都是讲了实验室开始实验的一些准备工作，现在开始动手做实验了，其中影响实验结果重要因素之一的培养基，在实验过程中需要注意什么呢？现在我们就一起来从培养基制备，灭菌，贮藏这三个方面来学习吧

一：培养基的制备

实验室我们可以买成品化培养基或者是脱水培养基，使用时按照瓶子上的比例加水灭菌就可以了，加水一般使用的是纯化水，也就是蒸馏水和去离子水，这类培养基在购买回来后需要做培养基的适用性实验才可以用，瓶子上应标明有效期，生产厂家，贮存条件等。还有一种是要自己制备的，按照药典上的方法去制备，为保证培养基的质量和稳定性，称量时需要准确的称取各组分，需要用干净的器皿盛放，清洗器皿时需要用纯化水过滤最后一遍，防止清洁用品和上一次存放的物品残留在上面造成假阳性或假阴性结果出现

二：培养基的灭菌

培养基灭菌有哪些注意事项呢？一般采用湿热灭菌法，针对一些对热敏感比较严重的培养基可以采用薄膜过滤法，孔径是0.22um，湿热灭菌要注意灭菌锅的装载量，一般以塞满灭菌锅底部为准，太多的装载量会影响灭菌锅里的热分布，因为它是高压蒸汽灭菌，如果培养基多的话要适当的增加灭菌时间，但不可过度灭菌，培养基或多或少对于热都会有敏感，过度灭菌会破坏培养基的组成成分，造成它的透明度下降，颜色加深，有沉淀，琼脂的凝固力下降，pH的改变等等；琼脂培养基加热煮沸灭菌后分装，分装时要把瓶子外部上的水分擦干，防止因倾注培养基时水分滴落污染培养基；如果是二次融化最好用水浴锅，使热量分布均匀，加热时间不可过长，在45℃的水浴中，不得超过8小时，也不能用电炉，若用电炉应用石棉网，温度要适当调大些，缓慢升温可能会造成培养基过度受热；如果是用来测试环境的培养基，比如大豆琼脂培养基，需要在终端灭菌，也就是在最终容器中灭菌

三：测定pH

每批培养基灭菌后均应进行pH检查，灭菌后等培养基冷却至25℃后以无菌操作取出少量培养基检查，除非经验证表明培养基的pH允许的变化范围很宽，否则一般不能超过规定的±0.2，何为验证，就是做实验证明在这个范围内菌种生长良好。当培养基分装时需要检查平皿或试管是否完好，固体培养基是否因水分流失而造成表面有裂缝等

四：培养基的贮藏

灭菌好的培养基应立即拿出来，不得放在高压灭菌锅中保存，防止过度加热造成成分破坏。灭菌好后的培养基应避光，保存在2~25℃的环境中，若保存在非密闭容器中一般有效期在三周；非密闭容器？就是我们在实验中用到的试管，三角瓶，平皿等，这些由于没有完全密封好，放置时间过长会造成微生物污染和水分流失。而存放在密闭容器中的保质期可长达一年。琼脂培养基不得在0℃或0℃以下保存，会破坏琼脂的凝固性。为什么制备好的培养基需要放在避光低温处保存？光和温度太高都会造成培养基被分解，而温度过高还可能存在细菌感染的风险

五：培养基的质量控制

影响培养基质量的有哪些因素呢？成分配比，pH。成分配比如果我们买的是成品培养基问题不大，只要在灭菌后测量它的pH就行了，因为加热会使培养基的pH发生变化，如果是按处方制备的，需要精确称量各组分，每批培养基买回来后需要做适用性实验，包括促生长能力，抑制能力，指示特性这三个指标

总结一下，这一节学了关于培养基的知识，首先培养基买回来需要有接收记录，买回来后要做培养基适用性实验，做完了才可以使用，在使用过程中要有详细记录，比如培养基的配制，灭菌，测量pH和贮藏记录，以及在这些过程中的操作注意事项

制备：处方和成品化培养基不同，处方制备要根据药典精确称量各组分

灭菌：注意装载量和灭菌时间，环境测试的培养基需要在终端灭菌

测量pH：一般情况下不超过规定的±0.2

贮藏：2~25℃环境下