淀粉含量的测定蒽酮比色法,植物中淀粉的测定

淀粉是植物体内贮藏的高分子碳水化合物，它可以分解成葡萄糖、麦芽糖等成分。不同的植物所富含淀粉的部位是不同的，主要有种子、果实、果梗、茎、根茎、球茎、鳞茎、 根、块根、髓心、皮层等。植物淀粉具体检测方法如下：

一、实验试剂

以下所有试剂如无特别注明，均为分析纯。实验用水为蒸馏水，去离子水或相当纯度的水。

（1）浓硫酸（比重1.84）；

（2）9.2mol/L HClO4；

（3）2%蒽酮试剂；

（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。

二、实验仪器

100ml容量瓶、分析天平（0.0001g）、水浴锅（BHS-4，宁波市鄞州群安实验仪器有限公司）、离心机（KH20A，湖南凯达科学仪器有限公司）、分光光度计（UV-1800PC，上海美普达仪器有限公司）等

三、实验步骤

（1）样品提取

将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸30min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，4000r/min离心10min，其残渣加10ml蒸馏水重复提取，至淀粉水解完全度测试不显示蓝色为止，并合上清液，用蒸馏水定容至100ml，待用。

（2）制作标准曲线

取小试管11支从0～10编号，按下加入溶液和蒸馏水。

按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以淀粉含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

（3）显色测定

取植物提取液代替标准淀粉溶液，按上述步骤进行淀粉含量的测定，读取 OD值，从标准曲线得到提取液总的淀粉含量，然后再行计算样品中的淀粉含量。

四、计算

按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；

V－提取液总量（ml）；

a－显色时取液量（ml）；

W－样品重（g）。

注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。

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1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定
碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100?时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。此法灵敏度高，糖含量达30 ,g即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定
氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。 3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定
考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内(0-1000 ,g /mL)，其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

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植物组织中淀粉含量的测定
【原理】 淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。【仪器与用具】电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0
【原理】
淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用苯酚或蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。
【仪器与用具】
电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。
【试剂】
（1）浓硫酸（比重1.84）；
（2）9.2mol/L HClO4；
（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；
（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。
【方法】
1．标准曲线制作
取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。
以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。
表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量
管 号
0
1～2
3～4
5～6
7～8
9～10

淀粉标准液(ml)
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0

蒸 馏 水（ml）
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0

淀粉含量（mg）
0
40
80
120
160
200
2．样品提取
将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。
3．测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。
按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。
淀粉含量（%）=
式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；
V－提取液总量（ml）；
a－显色时取液量（ml）；
W－样品重（g）。
注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。